進動物房之前看完這些科普問答,秒變達人!

2019-07-31 14:40 by 凯时登录平台生物


科研的路,是一條漫漫長路,需要不斷地學習與探索。在這期間,經常會涉及一些動物實驗,小鼠是最常使用的實驗動物。那對于一只從未接觸過小鼠的實驗小白來說,有一些功課是必須要提前完成的。


接下來以一問一答的形式爲大家介紹幾點小鼠相關的基本知識,同時貼心的小編也已將這些知識點整理歸類,印制在《小鼠飼養繁育科普知识》海报上,若想申領海報,可在文末免費獲得。


常見近交系小鼠品系有哪些?我的實驗應選擇何種背景小鼠?

主要包括有C57BL/6 、BALB/c、FVB等

(1) C57BL/6?小鼠也叫Black 6 (B6)、C57 或C57 Black 6,是使用最为广泛的近交系小鼠。毛色为黑色,是目前基因工程小鼠模型、人类疾病小鼠模型、自发或诱导突变品系最常用的遗传背景。

(2) BALB/c 小鼠毛色为白色,被大家熟知主要是由于其在单克隆抗体与免疫学研究中的贡献。BALB/c小鼠对放射线极为敏感。乳腺癌发病率低,但随着年龄增长,患其他癌症(如肺癌和肾癌)的几率大为增加。

(3) FVB 小鼠毛色白色,起源于Swiss 小鼠。该小鼠受精卵有大而显著的原核,常用于显微注射,另外还具有繁殖能力强、产仔数多的特点。FVB 小鼠自发腫瘤率低,但化学诱导后易发鳞状细胞癌。


常見實驗動物分爲幾級?

根據國務院批准的《實驗動物管理條例》,按照相應的微生物控制標准,實驗動物分爲四級:一級,普通級動物;二級,清潔級動物;三級,無特定病原體級動物;四級,無菌級動物。

(1)?普通级动物 conventional (CV) animal:不携带所规定的人兽共患病病原和动物烈性传染病的病原。简称普通动物。?

(2)?清洁级动物 clean (CL) animal:除普通级动物应排除的病原外,不携带对动物危害大和对科学研究干扰大的病原。简称清洁动物。

(3)?无特定病原体级动物 specific pathogen free (SPF) animal:除清洁动物应排除的病原外,不携带主要潜在感染或条件致病和对科学实验干扰大的病原的实验动物。简称为SPF动物。

(4)?无菌级动物 germ free (GF) animal:动物体内、外无可检出的一切生命体的动物。简称为无菌动物。


小鼠編號標記的方法有哪些?

(1) 断趾编号法:断趾法是最常见的编号方法,根据对新生小鼠前肢 4 趾,后肢 5 趾的切断位置来进行编号。断趾时,应切断其 1 段趾骨,不能只断趾尖,防止伤口痊愈后辨别不清楚,此法常用于出生 7 天内的小鼠。

(2) 耳标法:用专门的耳孔机在小鼠耳朵上打孔或造成缺口,或者用剪刀在耳朵边缘剪出不同的缺口进行编号。打孔后必须用消毒过的滑石粉抹在打孔局部,以免伤口愈合过程中将耳孔闭合。

(3)?染色法:用毛笔或棉签蘸取化学药品,在实验动物体表不同部位涂上斑点,以示不同编号。常用染液有:3–5% 的苦味酸溶液(黄色);0.5% 的中性品红溶液(红色);2% 的硝酸银溶液(咖啡色)。


如何觀察小鼠是否有疼痛?

動物實驗的結果與實驗動物的狀態息息相關,如果實驗動物的基本生活需求不能被滿足,使它們生活在痛苦的應激狀態下,那麽它們在實驗中就會有不正常的反應,研究人員得到的實驗結果就不能保證准確可靠。

以下疼痛識別和止痛措施供參考:

图0-1.png


我的小鼠是否懷孕,多久生崽,是雄是雌呢?

性成熟周齡:6-8周

平均發情周期:4-5天;發情時間大約20h;分娩後20h開始發情

懷孕和斷奶時間(品系依賴):懷孕19-21天;出生後20-21天斷奶

性別判斷:雄性小鼠生殖器與肛門之間的距離是雌性小鼠的2倍

小鼠檢栓:陰道栓常視爲交配成功的標志。雌鼠交配後10-12h,在陰道內會形成一個白色的陰道栓,這是受孕的標志。通常下午合籠,第二天早晨或上午檢栓。(注意:見栓不等于懷孕,不見栓也不等于未懷孕)


基因工程小鼠拿到後,如何設計繁育策略,快速得到實驗用鼠?

(1) 轉基因小鼠?

轉基因阳性小鼠与野生型小鼠交配:TG × WT

图1.jpg

(2)基因敲除/敲入?

杂合子与杂合子交配,获得纯合子:+/-?× +/- → -/-

对于ES細胞打靶途径获得的小鼠:

图2.jpg

對于CRISPR/Cas9途徑獲得的小鼠:


图3.jpg


(3)條件性基因敲除

获得 flox 纯合同时 Cre 阳性的小鼠:(f/+;Cre-)×(f/+;Cre+)→f/f;Cre+

图4.jpg


这样最终可以获得 1/8的 flox 纯合且带有 Cre 的條件性基因敲除小鼠(f/f;Cre+)。如果觉得效率过低,也可以在繁育 f/+;Cre+?的同时,繁育 flox 纯合子(f/f),再将这两种小鼠相互交配。这样,就可以获得 1/4 的 f/f;Cre+ 敲除小鼠啦。


图5.jpg


?

你是不是跟着小编在回答每个问题呢?有些问题看似简单,但想要完全掌握,还真得花点时间和精力。文章开头提到的《小鼠飼養繁育科普知识》海报,简短的文字配清晰的图片,通俗易懂,贴在动物房或实验室墙壁上,不经意间便轻松记忆。



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