基因敲入

基因敲入(Knock-in)是在目的基因位置引进特定的突变或外源基因,比如在目的基因引入點突變(模拟人类遗传疾病模型),或将报告基因(如EGFP、RFP、mCherry、YFP、LacZ、Luciferase等)或需要表达的功能性cDNA(如Cre、Dre等)通过同源重组的方式引入目的基因的特定位点,从而使报告基因或其他cDNA的表达与目标基因的表达一致。若用报告基因或cDNA取代小鼠本身的基因,则敲除和敲入同时发生。将人源基因替换小鼠内源基因或将人源cDNA插入到小鼠内源基因ATG位置,还可定制人源化小鼠模型。

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基因敲入(Knock-in)模型的應用:

  • 模擬人類遺傳機制,探索致病機制

  • 示蹤基因表達

  • 进行譜系示蹤,追溯细胞起源

  • 將小鼠基因人源化,加速藥物研發

  • 將分子遺傳學工具引入小鼠模型中


基因敲入模型包括


通过CRISPR基因編輯技術,构建一个基因敲入小鼠模型一般需要6-9个月。

通过ES細胞打靶技术,构建一个基因敲入小鼠模型一般需要9-12个月。

您可以聯系我們的技术顾问,为您设计并定制您的基因敲入小鼠模型。


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常規基因敲入

外源基因共表達策略:

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外源基因替代小鼠內源基因表達策略(即敲入同時敲除):

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點突變


将點突變(人类致病候选點突變)引入到小鼠同源基因对应位置。

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条件性點突變

将點突變(人类致病候选點突變)与Cre-LoxP系统结合,引入到小鼠同源基因对应位置,可实现组织特异性點突變。

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通过插入Loxp位点和含有突变位点的Exon实验基因的条件性點突變。

条件性基因點突變ES打靶策略示意图.png




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人源化

將小鼠內源基因替換爲人源同源基因,構建用于疾病、免疫、生理學研究以及抗體藥物篩選及藥效評價的人源化基因工程小鼠模型。


完整替換策略:

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直接插入人源cDNA策略:

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